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质粒构建重组质粒可望建立以GFP基因为基础的有效的基因标记系统

发布于 2013年12月12日

[摘要]质粒构建重组质粒可望建立以GFP基因为基础的有效的基因标记系统。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、质粒构建重组质粒、南京蛋白表达、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***

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构建并筛选出能在哺乳细胞表达的重组质粒。方法:以含CFPcDNA报告者基因 的穿梭质粒pGFP—1为载体,选用人巨细胞病毒启动子,采用基因重组技术构建重组质粒。结果: 重组质粒及其酶切液的琼脂糖凝胶电泳图谱表明重组质粒的构建成功。结论:该研究技术路线设 计合理,以构建的重组质粒为分子工具.可望建立以GFP基因为基础的有效的基因标记系统。

第一种方式即将基因和可以表达的载体如PET,PGEX等酶切后直接连接,再转化入感受态细胞第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接,再将构建成功的克隆载体和PET等表达载体,酶切后连接,转化入感受态细胞,这种情况针对,直接PCR产物连不上的情况

将目的DNA从这一载体插入到另一载体的过程。在基因分离过程中一般先将分离的DNA片段克隆到不能表达的克隆载体,测序确定后再重组到能表达的载体;或者从一个表达不适合的载体重组到另一个表达适合的载体,包括一下几个过程:
1.从原来载体分离出特定DNA,即“插入DNA”
2.根据实验目的选择合适载体
3.对插入DNA与载体分别进行酶切或者脱磷酸化处理
4.酶切完毕的DNA与载体连接
5.连接DNA转入合适的宿主菌,获取重组体
6.筛选、检测重组体

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