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质粒构建基因片段与同样经过酶切的载体就可以连到一起形成环状完成质粒的构建

发布于 2013年12月10日

[摘要]质粒构建基因片段与同样经过酶切的载体就可以连到一起形成环状完成质粒的构建。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、质粒构建基因片段、最先进的蛋白表达、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***

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如果是需要把一个特定的基因片段扩增后,插入到载体上构建质粒,则要根据载体上多克隆位点带有的酶切位点,在自己的目标基因片段上下游都分别设计一段序列,并在设计的序列中引入载体上的酶切位点。这个时候设计出来,用于完成PCR扩增,并能够在目标序列上下游都引入酶切位点的两段序列就叫做质粒构建引物。这样扩增获得的目标片段两端就带有了酶切位点,经过酶切后,与同样经过酶切的载体就可以连到一起,形成环状,完成质粒的构建。

已发现有质粒的细菌有几百种,已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小,约为细菌染色体的0.5%~3%。根据相对分子质量的大小,大致上可以把质粒分成大小两类:较大一类的相对分子质量是40×106以上,较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质,可以把质粒分为两类:一类是严紧型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有1~2个质粒;另一类是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继续复制,每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关,某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型,而在变形杆菌内则属松弛型。

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