据南京巴傲得生物科技有限公司2013年11月29日9:25最新数据分析：质粒构建基因利用荧光显微镜和流式细胞仪检测并比较其转染效率。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
基因载体的转染、表达效率低和存在安全问题是基因治疗的难点。由于传统病毒及质粒载体含有大量外源基因, 其表达有可能引发较严重免疫副反应。本课题旨在新的设计思路上开发高效安全基因治疗载体。 微链载体利用设计好的Cap序列封闭基因表达框两端, 起到防止细胞内核酸外切酶降解的作用。从pEGFP-N3质粒中分离纯化得到GFP基因作为微链载体的报告基因。将微链载体与原质粒载体(pEGFP-N3质粒)分别转染入真核细胞, 利用荧光显微镜和流式细胞仪检测并比较其转染效率。结果显示微链载体在293、CNE2、3T3、B95-8等真核细胞中的转染、表达效率较高, 并具有较小的细胞毒性。初步证实了微链载体在真核细胞中转染、表达效率及安全性等方面具有一定的优越性。
随机测序战略又称鸟枪战略(shotgun strategy),此策略是将人 类基因组DNA用机械方法随机切割成2Kb左右的小片段,把这些DNA片段装入适当载体,建 立亚克隆文库,从中随机挑 取克隆片段.最后通过克隆片段的重叠组装确定大片段DNA序列.?
1991年,Hunkapiller T等首先应用鸟枪策略分析了小鼠T细胞受体和靶位的94.6kb基因组. 19 95年,美国私立基因组研究所(TIGR)所长Venter JC率先应用鸟枪策略对微生物基因组测 序 并取得了成功.同年完成的流感嗜血杆菌的序列测定完全是用shotgun策略直接进行的.该实验充分证明了此策略是分析微 生物基因组全序列的有效策略之一.从1998年起,Venter领导的研究小组对人类全基因组采用鸟枪 战 略测序DNA提出大胆构想,计划在三个层次上进行测序,即对每一层次克隆的两端的称为序 列标签联结子(STC)的500bp进行测序.第一个层次用BAC做载体,插入片段为150kb,并计划 构建30万个BAC克隆,对每个BAC两端的500bp直接测序,获得10%的人类基因组序列,平均每 5kb就有一个500bp序列标记.第二层次是用低拷贝质粒作载体,插入10kb片段,构建500万 个克隆,对克隆两端的500bp测序,得到50亿个碱基序列.第三层次是用多拷贝质粒作载体 ,插入2kb片段,计划构建3000万个克隆,再对每个克隆的500个碱基直接测序,可获得300 亿个碱基序列
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