据南京巴傲得生物科技有限公司2013年11月28日17:30最新数据分析：质粒构建基因片段如何选择?南京巴傲得公司--公布最新质粒构建技术。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
重组时选择你的目的基因上没有，而质粒的多克隆位点上有的酶切位点，一般重组质粒需要两个酶，所以你要选择两个酶切位点，注意尽量避免使用切出平末端的酶。重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序，这个不能错，不然序列就会接反。一般设计重组引物的时候，在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列，在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点，酶切位点加好后，注意5’端还需要加上保护碱基，这个具体你可以去查下内切酶的说明书。然后你要注意，根据你的载体需要，是否要在引物上带上启动子和终止子。
如果是需要把一个特定的基因片段扩增后，插入到载体上构建质粒，则要根据载体上多克隆位点带有的酶切位点，在自己的目标基因片段上下游都分别设计一段序列，并在设计的序列中引入载体上的酶切位点。这个时候设计出来，用于完成PCR扩增，并能够在目标序列上下游都引入酶切位点的两段序列就叫做质粒构建引物。这样扩增获得的目标片段两端就带有了酶切位点，经过酶切后，与同样经过酶切的载体就可以连到一起，形成环状，完成质粒的构建。
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