据南京巴傲得生物科技有限公司2013年12月17日15:00最新数据分析：质粒构建巴傲得生物公司从事生物技术产品的开发及销售,一度知名。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的蛋白表达、、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
自杀性质粒载体完全可以自己构建，只要保证两点：１，自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，也就是说载体上不能有能在宿主菌中复制的复制子；２，要由筛选标记．
自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，否则会导致细菌染色体突变株的构建失败。但是在构建时，要注意以下方面：
1。在制备质粒载体和DNA插入片断时：2ug 5kb大小的线状DNA大约含有1.4poml/L5'末端磷酸。5‘突出端脱磷需要CIP0.01u/pmolDNA末端，平端或凹陷脱磷需CIP0.5u/pmolDNA末端。
2。连接质粒载体和DNA插入片断时：
（1）初次实验的可以建立几种不同的连接体系，比如插入片段与载体分子数比率可以为3：1，1：1，或1：3。
（2）可以尝试三种温度和时间的连接如4度，过夜；15度，4－6小时；25度，1小时。
3。细菌转化和筛选时：
（1）如果是感受态细胞，－80度储存的在5－6周后,转化率低。可用一已知标准闭环质粒鉴定感受态细胞的转化能力。
（2）用无DNA转化物的感受态细菌铺板，如果有菌落生长，说明其中抗生素浓度不够。
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