据南京巴傲得生物科技有限公司2013年11月18日9:50最新数据分析:质粒构建供应致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的蛋白表达、、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***
重组质粒,即基因载体。是一个复制子,在细胞内可以自主复制,细胞分裂时,质粒随机分配进入子细胞,类似细胞质的母性遗传(如线粒体、叶绿体等)。如何检测?质粒的检测因质粒性质不同而不同,一般人工质粒有抗性基因,可以通过抗性筛选而大致判断。最经典的质粒确认是质粒DNA提取(不含有宿主DNA的)之后进行电泳确认其大小(3条带)。还可以通过质粒上特殊序列的PCR扩增而确认。你说的提取宿主基因组一般方法所得DNA均包括质粒DNA在内可用于PCR扩增模板。
我实验中基本没有质粒浓度很低的情况,你提取质粒前有把菌液混匀的吧?还有就是:我一般提取质粒后会跑个电泳,看下条带的亮度,也就是浓度啦,然后根据浓度调整酶切时加的质粒的量,我酶切一般都是过夜,然后回收,连接,转化,转化后挑取阳性菌摇菌提质粒,这步之后我要加个酶切检测,条带正确的,再送去测序你这个会不会是假阳性,所以序后条带不对呢?建议你重组子摇菌提质粒后,你可以根据你插入的目的条带,多选几对酶,酶切,条带对的再送测,不对的就重新挑菌,再不对,就赶紧进行下一次连接转化。
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