质粒构建方案含目的基因—目的基因的这种重组片段的就被杀死

据南京巴傲得生物科技有限公司2013年11月11日11:25最新数据分析：质粒构建方案含目的基因—目的基因的这种重组片段的就被杀死。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、、最先进的、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:***

转入外源基因的农杆菌不能较载体，它本身是外源基因的受体，携带外源基因的质粒或者噬菌体才是载体。你想问基因表达载体的构建，质粒构建这个问题太大，而且表达载体多种多样，用处也很多，所以很难一下子概况。我只能大概说一下：
    原理：将外源基因片段与载体连接（载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒），将重组的载体转染受体细胞，使质粒构建之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内，是宿主细胞能够表达载体上的外源基因，从而获得新性状或者新产物。
    大概步骤：1）从基因组或cDNA上克隆得到完整的目的基因（至少包含CDS区），通常在两端加粘性末端或重组位点2）选择合适的表达载体（真核、原核、噬菌体、某些病毒、标记等）3）将克隆得到的目的基因与载体连接4）将重组载体通过某种手段转入受体，即宿主中（化学转染、脂质体、电转、显微操作等）5）质粒构建筛选阳性的宿主细胞并扩繁.

构建之后，这三种情况都是存在的，然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞），在质粒上会有某种抗性基因，就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素，就加入这种抗生素，质粒构建含目的基因—目的基因的这种重组片段的就被杀死了）。然后将剩下的继续培育，再利用DNA分子杂交技术，将质粒-质粒的排除，剩下的就都是符合的了。（再利用mRNA分子杂交和抗原抗体杂交，检验能否正常表达。这就是检验基因工程是否成功的了，与筛选你说的那三种无关）

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