质粒构建检测获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒载体上

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重组时选择你的目的基因上没有，而质粒的多克隆位点上有的酶切位点，一般重组质粒需要两个酶，所以你要选择两个酶切位点，注意尽量避免使用切出平末端的酶。重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序，这个不能错，不然序列就会接反。一般设计重组引物的时候，在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列，在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点，酶切位点加好后，注意5’端还需要加上保护碱基，这个具体你可以去查下内切酶的说明书。然后你要注意，根据你的载体需要，是否要在引物上带上启动子和终止子。

质粒的检测因质粒性质不同而不同，一般人工质粒有抗性基因，可以通过抗性筛选而大致判断。最经典的质粒确认是质粒DNA提取（不含有宿主DNA的）之后进行电泳确认其大小（3条带）。还可以通过质粒上特殊序列的PCR扩增而确认。你说的提取宿主基因组一般方法所得DNA均包括质粒DNA在内可用于PCR扩增模板。

获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒载体上，在引物上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控。因为可在载体和目的基因上酶切产生相同的切口。也有不需要加酶切位点的T载体，但连接过程效率不高还会有反向的错误连接。

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