据南京巴傲得生物科技有限公司2013年7月30日9:40最新数据分析：质粒构建使用南京巴傲得最先进技术,使得质粒构建技术在市场普及。巴傲得生物科技有限公司是专业从事、质粒构建商家、、质粒构建服务商IHC试剂盒、抗体定制等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售，致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线：***。
通过分子生物学手段构建重组质粒，将其转入野生型大肠杆菌W3110，分析含苏氨酸操纵子基因的质粒及质粒定点突变解除反馈抑制时，对 L-苏氨酸积累的影响。【方法】以 W3110染色体DNA为模板，PCR扩增苏氨酸操纵子基因，即启动子THrLp 、编码前导肽基因thrL以及thrA 、thrB 、thrC 基因，通过重叠延伸PCR的方法对thrA 基因定点突变，解除苏氨酸对它的反馈抑制，构建出重组表达质粒pWYE112 和pWYE134,5L发酵实验测定L- 苏氨酸的产量。【结果】经 5L发酵罐发酵产酸实验，W3110 的L-苏氨酸产量为0.036±0.004g/L，携带含苏氨酸操纵子质粒的W3110 菌株L-苏氨酸产量为2.590±0.115g/L ，质粒上thrA解除反馈抑制后，L- 苏氨酸的9.223±1.279g/L 。【结论】过表达苏氨酸操纵子基因可以使 L-苏氨酸积累，进一步解除thrA 基因的反馈抑制，可以增强L- 苏氨酸积累的效果，为L- 苏氨酸工程菌改造的进一步研究奠定了基础。
重组质粒体外表达目的蛋白的相对分子质量（Mr）约为55×103。免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体，其中IgG2a与IgG的比例显著高于IgG1与IgG的比例；T淋巴细胞体外经ConA刺激后SI达到160.67，显著高于对照组（14.04，P＜0.05）；产生IFN-γ的CD8+T淋巴细胞数目以及特异杀伤率均显著高于对照组小鼠（P＜0.05）。
对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。
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