简要概述实时荧光定量PCR仪分析检测过程进行的步骤

：TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累，与标准曲线对比进行定量分析。      

SYBR荧光染料：在传统PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料能特异性地掺入DNA双链，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，这样就保证了荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。当PCR循环复制时DNA双链也成倍增长，同样SYBR染料的荧光的信号也随之增倍，通过实时监测整个PCR进程中荧光信号的积累，与标准曲线对比进行定量分析。 二者不同点：实时荧光定量 PCR包括探针类和染料类两种 ,探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加,由于增加了探针的识别步骤 ,特异性更高;染料类如 SYBR Green I则是利用与双链DNA 小沟结合发光的理化特征指示扩增产物的增加，不利用杂交原理，则简便易行 ,成本较低。荧光染料的优势在于它能监测任何 dsDNA序列的扩增,不需要探针的设计,使检测方法变得简便,同时也降低了检测的成本。然而正是由于荧光染料能和任何dsDNA结合 ,因此它也能与非特异的dsDNA(如引物二聚体)结合 ,使实验容易产生假阳性信号。引物二聚体的问题目前可以用带有熔解曲线(melting curve)分析的软件加以解决。

西安天隆科技有限公司是专业生产研发ATP荧光检测仪、、核酸提取仪、核酸纯化仪、PCR仪、基因扩增PCR仪